貨號：WTA1112    產品名稱：人白介素5（IL-5） ELISA試劑盒    Anti-Human IL-5 ELISA Set    規格：48T/96T    品牌：進口原裝/國產

上海蔚霆生物科技有限公司長期提供各種種屬、各種系列Elisa試劑盒，標準品，對照品，生物試劑，科研抗體，細胞株等，生物耗材等，價格實惠，質量有保證,信譽。歡迎來電索取各ELISA試劑盒產品說明書。凡購買目錄本公司ELISA檢測試劑盒可免費提供代測服務。

待檢樣本可以為細胞培養上清液，血清， 血漿，尿液，組織液，心房水，體液標本等等，如果您準備代檢測，請寄標本時需注明以下情況： 1、標本編號；2、所測項目；3、是否做復孔；3、聯系方式；4、實驗后標本是否寄回。

Elisa試劑盒檢測原理：采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。

保存：2-8℃

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

4. 酶標儀（450nm）

5. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

6. 37℃恒溫箱

操作注意事項

11.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

12.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

13.  預處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

14.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

15.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

5.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

6.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

15.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

16.  設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

17.  待測樣本孔各加待測樣本50μL；

18.  隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

19.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

20.  所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

21.  所有孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

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