貨號：WTA1930    產(chǎn)品名稱：HIF1A （人源） ELISA試劑盒    HIF1A （Human） ELISA Kit    規(guī)格：48T/96T    品牌：進口原裝/國產(chǎn)

上海蔚霆生物科技有限公司長期提供各種種屬、各種系列Elisa試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品，對照品，生物試劑，科研抗體，細(xì)胞株等，生物耗材等，價格實惠，質(zhì)量有保證,信譽。歡迎來電索取各ELISA試劑盒產(chǎn)品說明書。凡購買目錄本公司ELISA檢測試劑盒可免費提供代測服務(wù)。

待檢樣本可以為細(xì)胞培養(yǎng)上清液，血清， 血漿，尿液，組織液，心房水，體液標(biāo)本等等，如果您準(zhǔn)備代檢測，請寄標(biāo)本時需注明以下情況： 1、標(biāo)本編號；2、所測項目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實驗后標(biāo)本是否寄回。

Elisa試劑盒檢測原理：采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。

保存：2-8℃

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

4. 酶標(biāo)儀（450nm）

5. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

6. 37℃恒溫箱

操作注意事項

11.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

12.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

13.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

14.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

15.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

5.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

6.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

15.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

16.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

17.  待測樣本孔各加待測樣本50μL；

18.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

19.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

20.  所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

21.  所有孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

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