貨號：WTA4510，產(chǎn)品名稱：人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA試劑盒說明書，英文名稱：Human platelet membrane glycoprotein Ⅳ,GP-Ⅳ ELISA Kit，品牌：進口原裝/國產(chǎn)

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     ELISA 試驗 以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。在操作過程中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給實驗師帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。        下面分析 Elisa 試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法

    1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。

    2 加樣   可能原因： 1 ）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣； 2 ）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長 ( 特別是室內(nèi)溫度較高時 ) ； 3 ）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1 ） 標(biāo)本為血清： zui 好 將血液先自然存放 1-2 小時后，再用 3000rmp 離心 15 分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 5-10 次，放置一段時間后， 3000rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在 2-8 ℃ 冰箱中，若要貯存，則置于 -20 ℃ 的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4) 如果采用 AT 或其他全自動加樣， zui 好 選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。

    3   孵育   可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。

    4 洗板   可能原因： 1) 采用手工洗板 , 孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后 zui 好 在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。

    5 顯色   可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的 TMB 顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A 、 B 液應(yīng)避免接觸金屬器械。

    6 終止   可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

    7 讀板   如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。   所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸 ; 盡可能實現(xiàn) ELISA 檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn) ELISA 標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

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